中国农业科学院兰州兽医研究所

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重点项目——欧盟项目《严重危害中国绵、山羊的泰勒虫裂殖子抗原分子和免疫学特性分析及其在诊断和疫苗研制中的应用》

2004-5-24

重点项目——欧盟-中国科技合作项目
严重危害中国绵、山羊的泰勒虫裂殖子抗原分子和免疫学特性分析及其在诊断和疫苗研制中的应用
一、项目简称：ADDAV
二、参加单位：
欧盟：德国博士特尔研究中心( Dr J.Ahmed Research Center Bostel D-23845 Germany)、英国爱丁堡大学、葡萄牙实验生物技术研究所
中国：中国农业科学院兰州兽医研究所殷宏研究员<BR>甘南藏族自治州畜牧兽医研究所袁正朴副研究员<BR>农业部青岛动物检疫研究所吴鉴三副研究员
三、联系人：殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省兰州市盐场堡徐家坪11号，730046 电话：0931-8342515 手机：13609370818 传真：0931-8340977 电子邮件：yinhong@public.lz.gs.cn lvrikyc@public.lz.gs.cn
四、总经费：69.78万欧圆，中方共27.012万欧圆
五、执行日期：2000年9月-2004年8月
六、项目的背景与意义：本项目建议书所研究的对象为最近在中国发现的对绵、山羊危害严重，引起巨大经济损失的梨形虫（泰勒虫）。该泰勒虫在中国西北地区感染的绵山羊的数量约为1200万，当感染本病时，每头羊的经济损失为2美圆（人民币16圆），这样，中国绵、山羊每年因本病造成的经济损失达2400万美圆（约人民币1.7亿圆）。本项目将研究分子疫苗和诊断试剂，旨在最后控制该病，减少由该病造成的损失，提高畜产品的数量和质量，缓解因人口增长而引发的对畜产品需求量扩大的压力，保障畜牧业可持续发展。
七、项目的目标：本项目旨在研究能成功地控制泰勒虫病所需的技术，进而提高动物生产能力和动物福利，为达到这一目标，本研究项目的具体目的是：1、研制用于疫病监测的敏感特异的诊断方法，将建立酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应技术；２、对诊断技术在一特定的地理区域内进行评价；３、研制能抵抗本病的免疫预防方法，将在体外对寄生虫致弱。最后根据能诱导体液和细胞应答免疫的重组抗原和核酸的特性研制出分子疫苗。
八、项目简介：将在无血清培养系统中对泰勒虫中国株进行连续培养，利用高效液相色谱及SDS-PAGE分离纯化裂殖子抗原各个组分。用免疫血清对各组分中的免疫主导蛋白进行筛选。将筛选出能被不同虫株感染血清识别的抗原组分，保证不同地区分离株具有相同的保护性抗原，建立能通用的ELISA技术，将对编码该蛋白的基因克隆并表达应用于ELISA。同时将研制聚合酶链反应技术和反应线状印迹技术作为补充,用于同一宿主或媒介蜱体内不同虫种的鉴别诊断。在第一组免疫试验中，将应用不同的裂殖子抗原浓度，对实验绵羊进行免疫试验。试验耐过羊将用子孢子进行攻击，观察临床和免疫应答，尤其是Ｔ细胞应答。为研究免疫保护机理，将对免疫程序标准化和最佳化，将从免疫动物中建立Ｔ细胞系及其克隆，并做为探针用于检测保护性抗原挑选。根据抗原刺激不同主要组织相容复合物的动物免疫应答能力，对其编码基因克隆并重组表达，通过进一步明确其刺激细胞的能力和应答抗体的识别能力，这些抗原或作为重组蛋白或核酸疫苗进一步用于免疫试验。